Храм Святителя Николая в Толмачах, был построен в 1697 году. Когда в 1856 году семья Третьяковых поселилась в Замоскворечье, храм был обновлен на деньги многих купцов, в том числе и Третьяковых. Сам Павел Третьяков был глубоко верующим человеком, при нем церковь стала считаться музейной и домовой.
Храм Святителя Николая в Толмачах был закрыт в советское время и передан музею под запасники. К храму был пристроен корпус, специально для картины А.А. Иванова \"Явление Христа народу\", сделан переход между залами. С 1993 года церковь используется совместно с музеем. В ней постоянно находится Владимирская икона Богоматери.